酶切专家(站内联系TA)

　　这的看具体情况,一般来说,不建议用紧邻的两个酶切位点,可能影响其中一个的酶切效率.但也需要具体情况来分析,如果可能,将你的具体序列发上来,大家帮你分析XOooZzz(站内联系TA)

　　做是可以,不过建议酶切后用CIAP处理,以防止里面的单酶切片段自连.

　　cicelyzh(站内联系TA)

　　要根据距离和哪种限制酶的情况而定.有些能切开,有些不行.

　　jwucn(站内联系TA)

　　:hand:.帮您顶一个.:hand:zqxabc(站内联系TA)

　　可以的,临近的两个酶切位点可以分步酶切,一个一个切,先切一个,然后不跑胶直接加Bindingbuffer过柱洗脱,回收产物再进行下一个酶切.因分步酶切有损耗,所以质粒的量可以增加以保证回收浓度joan198108(站内联系TA)

　　尽量不要,临近位点可能导致一个酶的结合影响另一个酶的结合,还有就是有些酶需要的结合片段较长,分步酶切后也不一定能够实现山水88(站内联系TA)

　　可以的话把序列放上来大家给你分析吧

　　...山雨(站内联系TA)

　　这样子不好,酶切的效果好需要一定长度是保护碱基,挨着的位点切不动,分步切的话,buffer不一样,效果也非常一般,建议在引物上加酶切位点,这样就不受载体的限制了.

　　cory0931(站内联系TA)onyrre:

　　质粒的两个酶切位点,紧挨着的话,势必会影响双酶切效果,原因是：

　　内切酶结合时,一般都是需要微点周围有多余碱基,否则影响结合；

　　再者,酶切后的粘性末端不余怒重合；

　　若是连个酶切位点之间有几个碱基的间隔,比如说6个以上,一般是可以的；

　　至少,也得间隔4个碱基吧；

　　若是直接没有间隔,目前貌似没有多少成功的文献可循；wx1990(站内联系TA)

　　理论上可以,我最近做了个双酶切实验,两个酶切位点之间相隔五六个碱基,效果不错,但是最好不要紧挨着