草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒(GCRV)引起的,目前尚未找到防治药物.如图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接,并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图.图
草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒(GCRV)引起的,目前尚未找到防治药物.如图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接,并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图.图中P10和PH为启动子,箭头表示转录方向.PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因(DNA片段).请回答下列问题:
草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表
组别疫苗注射量实验鱼数死亡鱼数死亡率免疫保护率110μg20尾0尾0100%230μg20尾0尾0100%360μg20尾1尾5%95%空载体30μg20尾6尾30%70%对照020尾20尾100%0(1)制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗,获取大量PV7双基因时可采用PCR技术进行扩增,该技术除需要原料、模板、___外,还必须用___酶.PCR一般要经历三十次以上的循环,每次循环包括变性、复性和延伸三个阶段,其中变性是指___条件下,DNA分子___的过程.
(2)使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因,是为了防止___,用不同限制酶先后两次切割质粒,是为了防止___,有利于提高核酸疫苗构建的成功率.
(3)攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内,通过转录和翻译产生草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白,使草鱼生成抗体和记忆细胞,同时给草鱼注入相同浓度的GCRV,我,统计草鱼免疫保护率,实验结果说明___.导入空载体(普通质粒)的草鱼免疫保护率达到70%,但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加,可能的原因是___.核酸疫苗注射后,科学家发现PV7双基因在启动子的驱动下持续表达,至第49天核酸疫苗仍没有被降解,仍能检测到PV7双基因的转录.综上所述,与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比,核酸疫苗所具备的优点有___.