内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽,具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用,其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系.ET主要通过与靶细胞膜上的ET受体结合而
内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽,具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用,其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系.ET主要通过与靶细胞膜上的ET受体结合而发挥生物学效应.ETA是ET的主要受体,科研人员试图通过构建表达载体,实现ETA基因在细胞中高效表达,为后期ETA的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等奠定基础.其过程如图所示,图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的识别序列为CCC↓GGG,限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG.请分析回答:
(1)完成过程①需要加入缓冲液、原料、___和引物等,过程①的最后阶段要将反应体系的温度升高到95℃,其目的是___.
(2)过程③和⑤中,限制酶XhoⅠ切割DNA,使___键断开,形成的黏性末端是___;用两种限制酶切割,获得不同的黏性末端,其主要目的是___.
(3)构建的重组表达载体,目的基因上游的启动子的作用是___,除图示结构外,完整的基因表达载体还应具有___等结构(至少写出两个结构).
(4)过程⑥中,要用CaCl2预先处理大肠杆菌,使其成为处于容易吸收外界DNA的___的细胞.
(5)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,目的是___.