图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列,图2表-查字典问答网
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来自汪洪滨的问题

  图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶.它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C

  图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶.它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.现要培育含目的基因D的大肠杆菌,请回答下列问题:

  (1)为了提高试验成功率,需要通过PCR扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝,该过程除需目的基因和dNTP (包括dATP、dGTP,dCTP、dTTP)之外还需提供___和___.

  (2)图2中,启动子的作用是___.

  (3)分别用4种限制酶切割图1中的DNA片段,能形成黏性末端的是___.

  (4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是___.为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率,需将大肠杆菌用___进行处理.

  (5)为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,首先将大肠杆菌图3所示的培养基上培养,得到如图3的菌落.再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到图4所示的培养基上培养,得到如图4的结果(空圈表示与图3对照无菌落的位置).请推测:图3和图4培养基里含的抗生素分别是___,___.图4中生长的大肠杆菌中是否有目的基因D?___.

1回答
2020-11-0218:14
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马樟萼

  (1)利用PCR技术扩增目的基因需要以目的基因为模板,以四种脱氧核苷酸作为原料,同时还需要热稳定的DNA聚合酶(Taq酶)和引物.

  (2)启动子的作用是与RNA聚合酶结合,驱动基因转录出mRNA.

  (3)根据题干中提供的限制酶识别序列和切割位点可知,目的基因上均存在四种限制酶的识别序列,但是SmaⅠ限制酶切割得到的是平末端,其它三种酶切割得到的是黏性末端.

  (4)由图1可知,目的基因两侧是GGATCC序列,该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列,因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒,应选用限制酶BamHⅠ切割.为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率,需将大肠杆菌用Ca2+进行处理,使大肠杆菌变为感受态细胞.

  (5)用限制酶BamHⅠ切割质粒后,用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因,但没有破环抗生素B抗性基因,因此首先用含有抗生素B的培养基培养大肠杆菌,能生存下来的是含有普通质粒和重组质粒的大肠杆菌;再用含有抗生素A的培养基培养,能生存下来的是含有普通质粒的大肠杆菌,即图4中生长的大肠杆菌不含目的基因D.

  故答案为:

  (1)热稳定的DNA聚合酶(Taq酶)和引物

  (2)与RNA聚合酶结合,驱动基因转录出mRNA

  (3)MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ

  (4)BamHⅠCa2+

  (5)抗生素B 抗生素A不含

2020-11-02 18:18:15
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