【我想请问你关于real-timePCR中溶解曲线的横轴和纵-查字典问答网

来自孙连奎的问题

　　【我想请问你关于real-timePCR中溶解曲线的横轴和纵轴的意义?我做的两个样品里峰值在X的同样的位置,但一个样品的峰高,一个低.电泳出来的条带大小也不在一条线上.不知道是什么原因.】

　　我想请问你关于real-timePCR中溶解曲线的横轴和纵轴的意义?

　　我做的两个样品里峰值在X的同样的位置,但一个样品的峰高,一个低.电泳出来的条带大小也不在一条线上.不知道是什么原因.

1回答

2020-08-2303:17

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季画

　　横坐标是温度,每个温度点一个.一般从60到98度

　　纵坐标是荧光强度的变化值（不是强度本身）.一开始加热的时候,虽然荧光强度比较强,但是由于双链没有解离,所以荧光强度保持不变.当加热接近于PCR产物Tm时,双链开始解离,荧光强度变小,机器会比较前后2个温度点的荧光强度,然后把2者的差值标在图上.Tm到达时,有一般双链解离,这时的荧光强度变化最大（峰值）.再加热,双链全部解离,所以荧光强度的变化又变小了.

　　你PCR产物大小不一,但是只要有相同或者相近的Tm,峰值就有可能在一个位置上.如果实际测得的峰值和理论计算的吻合,问题不大.如果有差别,说明有非特异性产物,建议不要再用SYBRGREEN方法.